Выбор читателей
Популярные статьи
Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре +15 - +25 0 С.
На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают 0ab(анти-А+В), в середине - Аb (анти-В) и справа - Вa (анти-А), на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.
Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп 2-х серий. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0ab(анти-А+В), Аb (анти-В) и Вa (анти-А).
Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1.
Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой.
После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают.
Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 минут. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Через 3 минуты в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут.
Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации).
Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (см. табл.1).
Таблица 1
Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - ее отсутствие.
Как видно из таблицы, результат оценивается в зависимости от реакции исследуемых эритроцитов со стандартными сыворотками группы Оab (анти-А+В), Ab (анти-В), Ba (анти-А). В тех случаях, когда положительный результат получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы ABО(IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой контрольной пробе позволяет учесть положительный результат с сыворотками групп Оab (анти-А+В), Ab (анти-В), Ba (анти-А) как истинный, т.е. принадлежность исследуемой крови к группе AB(IV). При наличии панагглютинации, т.е. агглютинации со всеми сыворотками и, соответственно, невозможности определить групповую принадлежность по системе АВО, кровь больного подлежит обязательному направлению на СПК или в ОПК для исследования специалистом-изосерологом.
3. Определение группы крови системы АВО моноклональными реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ.
Реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными гемагглютинирующими сыворотками.
Порядок проведения исследования:
На планшет или пластину индивидуальными пипетками нанести реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями реагентов нанести по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01- 0,03 мл).
Смешать кровь с реагентом (в лунке планшета – тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; на пластине – чистой индивидуальной сухой палочкой).
Наблюдение за ходом реакции с реагентами следует вести при легком покачивании пластины или планшета в течение 5 минут. Агглютинация эритроцитов обычно наступает в первые 3-5 сек., однако наблюдение следует продолжить ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Учет результатов реакции агглютинации при определении групп крови моноклональными реагентами представлен в таблице 2:
Таблица 2
(+ ) – наличие агглютинации; (-) – отсутствие агглютинации
При положительном результате реакции агглютинации со всеми реагентами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов, для чего следует смешать на плоскости 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия с 1 каплей исследуемых эритроцитов. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия.
Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови.
Каждой группе дано условное обозначение: 0 (I
), А (II),
В (III),
AB
(IV
).
Установлено, что переливать можно только одногруппную кровь. В исключительных случаях, когда нет одногрупповой крови, а переливание жизненно необходимо, допустимо переливание иногруппной крови.
В этих условиях кровь 0 (I
) группы можно перелить больным с любой группой крови, а больным, имеющим кровь AB
(IV
)
группы, можно перелить донорскую кровь любой группы.
Поэтому, прежде чем начинать переливание крови, необходимо точно установить группу крови больного и группу переливаемой крови.
Для определения группы крови пользуются стандартными сыворотками групп 0 (I
), А (II),
В (III),
которые специально готовят в лабораториях станций переливания крови.
На белой тарелке на расстоянии3-4 см слева направо ставят цифры I
, II, III,
обозначающие стандартные сыворотки. Каплю стандартной сыворотки 0(I
) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный цифрой I
; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II)
группы под цифрой II;
так же берут сыворотку В
(III)
группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.
Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворотки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномерного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой. Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови. В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглютинации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.
В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I
) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сывороткой не произойдет.
Если обследуемый имеет А (II)
группу крови, то агглютинации не будет только с сывороткой группы А (II)
, а если обследуемый имеет В (III)
группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III).
Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB
(IV
)
группы.
Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так называемый резус-фактор.
Если этим лицам провести повторное переливание крови, содержащей этот фактор, то возникнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфликтом, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фактора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.
Ускоренный способ определения резус-принадлежности.
На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же группы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42- 45°С. Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh-).
Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.
Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть занесены в паспорт больного.
Существует два метода: по стандартным сывороткам (прямая реакция) и стандартным эритроцитам (обратная реакция).
Определение группы крови по стандартным сывороткам
Для определения группы крови по этой методике определяемую кровь смешивают с сывороткой уже известных групп и по наличию или отсутствию агглютинации судят о группе крови. Для определения применяют заранее приготовленные «стандартные сыворотки» крови О (I), А(II), В (III) двух разных серий для каждой группы. На предметное стекло или фарфоровую тарелку наносят по 2 капли стандартных сывороток (предварительно карандашом на стекле отмечают группу сыворотки) попарно из каждой серии.
Сыворотки обязательно берут разными пипетками. Палец исследуемого больного обрабатывают спиртом и производят укол специальной иглой-скарификатором. Берут 6 капель крови (не более булавочной головки каждая) и помещают их рядом на тарелку со стандартными сыворотками. Отдельными стеклянными палочками перемешивают кровь и сыворотки. Через 5 мин к сывороткам добавляют по 1 капле физиологического раствора (для исключения ложной агглютинации).
Результаты исследования:
если агглютинация отсутствует во всех трех парных каплях, то исследуемая кровь принадлежит к первой группе крови О (I);
отсутствие агглютинации с сыворотками О (I) и В(П) говорят о том, что группа крови А (II);
при отсутствии агглютинации с сывороткой группы крови В (III) и при агглютинации с сыворотками О (I) и А (II) следует считать, что группа крови В (III);
агглютинация со всеми тремя сыворотками обозначает принадлежность крови к четвертой группе — АВ (IV).
Определение группы крови по стандартным сывороткам из двух серий производят во избежание ошибок. При агглютинации с тремя сыворотками — AB (IV) группа крови — необходимо провести дополнительное определение с сывороткой AB (IV) группы крови, которая хранится в специальной запаянной ампуле.
В сомнительных случаях исследование повторяют с другими сериями сывороток или производят определение при помощи стандартных эритроцитов.
Определение группы крови по стандартным эритроцитам
На фарфоровую тарелку наносят 3 капли сыворотки, приготовленной из крови реципиента. К сывороткам добавляют по булавочной головке стандартных эритроцитов О (I), А (II) и В (III). Через 5 мин добавляют по одной капле физиологического раствора.
Результаты исследования:
«Хирургические болезни», С.Н.Муратов
В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность. Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.
Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции. Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур. Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.
Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».
Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.
Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.
Выделяются следующие группы крови по составу:
Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.
Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.
Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.
Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.
Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система - посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.
Разведение производится так:
Непосредственно исследование проводится таким образом:
Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.
Здесь возможны варианты:
Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.
В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.
Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.
Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.
На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов.
Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.
Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.
Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:
Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками | Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами | Группы крови | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
0(I) | A(II) | B(III) | AB(IV) | 0(I) | A(II) | B(III) | |
– | – | – | - | – | + | + | 0(I) |
+ | – | + | - | – | – | + | A(II) |
+ | + | – | - | – | + | – | B(III) |
+ | + | + | – | – | – | – | AB(IV) |
Агглютинация;
– агглютинация отсутствует;
— реакцию не проводят.
Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.
Цоликлоны - синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.
Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.
Вид цоликлонов | Группа крови | ||
---|---|---|---|
Результат агглютинации | Анти-А | Анти-В | |
- | - | 0(I) | |
+ | - | A(II) | |
- | + | B(III) | |
+ | + | AB(IV) |
IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.
Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.
При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:
Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.
Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.
В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.
В наше время медицина достигла больших высот. Врачи способны проводить долгие операции и спасать людей даже из самых, казалось бы, безвыходных в плане выживания ситуаций. Однако, в таких случаях приходится сталкиваться с проблемой необходимости переливания крови. Долгое время это было мало осуществимо в связи с тем, что пациенты умирали очень быстро. Но данный вопрос был решен открытием понятия групп крови, а точнее обнаружения на эритроцитах антигенов и, в свою очередь, антител в плазме крови.
В начале двадцатого века Австралийский врач, по совместительству ученый К. Ландштейнер открыл наличие в крови антигенов и антител. Антигены находятся на поверхности эритроцитов. Их бывает 2 вида. Для простоты биологи обозначили их как A и B. В свою очередь антитела содержатся в плазме крови и получили названия α и β. Если A соединить с α, а B с β, начнется процесс сворачивания крови. Данная реакция носит название гемагглютинация.
Таким образом из имеющихся наборов антигенов и антител можно составить 4 типа крови, приведенных в таблице ниже:
Номер группы | Мировое обозначение | Антигены | Антитела |
---|---|---|---|
I | 0 | Отсутствуют | α и β |
II | A | A | β |
III | B | B | α |
IV | AB | A и B | Отсутствуют |
Важно! В зависимости от того, какой тип донорской крови предоставляется для переливания, кровь пациента либо сворачивается, либо нет. Первый случай грозит летальным исходом.
На текущий момент имеется достаточно большое количество способов определения группы крови. Но большая часть из них рассчитана на анализ в крупных лабораториях. Однако, даже если вы находитесь в маленькой деревушке или в месте, где никак не получится обратиться в подобные учреждения, возможность выявления номера группы крови все равно остается.
Определение группы крови осуществляется с применением четырех специальных стандартных сывороток, которые будут изготавливаться из крови человека. Они выпускаются либо во флакончиках, либо в ампулах по 2-5 мл и соответствуют разным группам крови:
Важно! На самом деле указанные реагенты при изготовлении не имеют цвета. Они окрашиваются специально, чтобы при использовании их было невозможно перепутать.
Также на этикетки наносятся:
Чтобы определить группу крови, понадобится:
На плоскую тарелку помещаются сыворотки в 2 ряда, после чего берутся стеклянные палочки. С их помощью в ряды вносится исследуемая кровь. Этими палочками она размешивается, после чего тарелку начинают покачивать. Если повезет, процесс можно отследить за 10-30 секунд, но лучше это делать до 5 минут, чтобы исключить возможность заторможенности реакции. Затем происходит изучение и расшифровка полученных результатов.
Внимание! В первую очередь следует обратить внимание на кружки, в которые была налита сыворотка II и III групп крови. Интерес представляет наличие мелких хлопьев, появляющихся в результате агглютинации - слипания эритроцитов.
Важно! Строго говоря, группу крови можно определить, имея сыворотки только 2 и 3 группы крови. Однако, как можно сделать вывод из сути метода, имеется большое влияние человеческого фактора. По этой причине сыворотки I и IV группы крови используются в качестве дополнительной проверки.
После процедуры используемая посуда должна быть хорошо промыта теплой водой и высушена. Затем ее можно использовать для дальнейших исследований.
Неточности результатов и их причины
Иногда бывает так, что сгустки слипшихся эритроцитов видны не очень четко. Во время проверки зачастую может быть добавлен изотонический раствор хлорида натрия. Он позволяет исключить вероятность ложной агглютинации, заставляя рассыпаться обратно хлопья, получившиеся не в результате процесса свертывания.
Важно! Если результат анализа виден не особо четко, его необходимо переделать и воспользоваться микроскопом, чтобы рассмотреть мелкую агглютинацию.
В случае четко выявленного результата можно сразу точно назвать пациенту его группу крови. Иначе следует обратиться к другим методам проведения анализа.
Не стоит забывать и о возможности ошибок, которые обычно происходят по следующим причинам:
- использование просроченной или слабой сыворотки;
- использование слишком большого количества исследуемой крови по отношению к объему сыворотки;
- реакция проводится намного дольше, чем положено нормативами;
- температура окружающей среды не соответствует нормальной, в результате чего происходит холодовая агглютинация эритроцитов.
Дополнительно стоит заметить, что в процессе высыхания по краям смеси сыворотки и исследуемой крови возможно образование зернистых участков, которые не могут служить показателями реакции.
Использование результата на практике
Как уже упоминалось, определение группы крови проводится для исключения летального исхода во время ее переливания. В идеале пациенту, принимающему кровь - реципиенту - необходимо переливать кровь той же группы, что и у него самого. Однако так получается далеко не всегда. Хотя бы потому, что людей с первой группой крови подавляющее количество - 50%. В то же время они являются универсальными донорами, поскольку у них отсутствуют агглютиногены, которые стимулируют процесс свертывания крови.
Внимание! Что касается пациентов с IV группой крови, то их можно назвать универсальными реципиентами, поскольку их организм способен принять кровь любой группы. В то же время их кровь не может быть перелита представителям другой группы.
Для наглядности совместимости доноров и реципиентов приведем таблицу:
Номер группы Для каких групп становится донором Для каких групп становится реципиентом I I, II, III, IV I II II, IV I, II III III, IV I, III IV IV I, II, III, IV В современном мире знание группы крови жизненно необходимо. От этого, с точки зрения врачей, будет зависеть коэффициент выживаемости из пациентов. С точки зрения обычных людей это шанс в экстренной ситуации сохранить свою жизнь. В связи с этим не лишним будет знать свою группу крови и, по возможности, проставлять ее в паспорт либо другие документы, поскольку риск здоровью и жизни может возникнуть в любой момент.
Видео — Определение группы крови
Видео — Определение группы крови и резус-фактора
Статьи по теме: | |
Душевнобольное искусство
О том, что психическими расстройствами страдали Ван Гог и Камилла... Расторопша — лечебные свойства уникальной травы и продуктов из нее Расторопша семена полезные свойства и противопоказания
Довольно высокое растение, которое имеет крупные пурпурные или лиловые... Сценарий на юбилей любимой маме Угадай мелодию их кинофильмов
За плечами долгий брак,Он не шутка, не пустяк!Шестьдесят он длится лет,В... |