Сколько стоит пцр анализ на туберкулез. Как проводится сама ПЦР-диагностика. Тест на ПЦР применяют в некоторых случаях

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) представляет собой современный и эффективный метод диагностики многих заболеваний, в том числе и туберкулеза. Такая процедура позволяет достаточно быстро определить возбудителей различных заболеваний. В итоге ПЦР на туберкулез помогает пациенту и его лечащему врачу своевременно начать терапию выявленной патологии.

Что касается обнаружения резистентности к противотуберкулезным препаратам, то доступен метод множественных пропорций, который составляет контрольный тест, но результаты которого берут четыре-шесть недель. Все эти тесты оценивают присутствие микобактерий, но первые два обнаруживают устойчивость путем определения генетических мутаций и, несмотря на то, что они так же быстро, как и методы бактериального роста, требуют обученного персонала, адекватной инфраструктуры, реагентов и сложного оборудования. и у них есть значительная стоимость, что затрудняет их использование в качестве обычных тестов для большинства медицинских учреждений в стране, за исключением некоторых частных больниц, имеющих достаточный экономический потенциал, и центральных государственных лабораторий, которые уже имеют у них есть некоторые диагностические платформы для молекулярной биологии.

Методика исследования

ПЦР-диагностика туберкулеза потребует предварительного забора материала. В качестве него подойдут следующие биологические жидкости:

При этом от того, какой именно материал был взят для исследования, будет зависеть достоверность полученного результата. Чаще всего такой предполагает забор крови, мочи или мокроты у пациента. При этом наиболее достоверный результат можно получить в тех случаях, когда в качестве материала выступает мокрота.

Кроме того, недавние исследования с этим молекулярным тестом включали множество клинических образцов из других мест, кроме дыхательных путей пациентов с внелегочным туберкулезом. Главная проблема заключается в необходимости обеспечения строгого стандарта до анализа на платформе с учетом широкого спектра форм обработки.

Мы исключили те изоляты, культура которых для микобактерий проявляла заражение во время чтения, а также пациентов, чья клиническая история не имела полной информации. Клиническая и эпидемиологическая информация. Клиническая и эпидемиологическая информация была получена из электронных медицинских записей пациента, а затем была зарегистрирована в форме, предназначенной для исследования. Что касается микробиологических результатов, были рассмотрены ручные записи и данные информационной системы Лаборатории микобактерий и молекулярной биологии учреждения.

Что касается крови и мочи пациента, то, несмотря на достаточно высокую частоту использования именно таких материалов, эффективность и актуальность выявления микобактерии туберкулеза данным способом является сомнительной.

Дело в том, что в таких биологических средах инфекция данного типа появляется либо при сепсисе, либо при диссеминированном туберкулезе. При локальных формах, которые встречаются значительно чаще в анализе крови и мочи могут отсутствовать какие бы то ни было изменения.

Различные типы тканей мацерировали в 2 мл суспензии физиологического раствора и жидкости центрифугировали при 500 мас. В течение 30 минут в холодильной центрифуге. Все образцы дезактивировали 4% -ным гидроксидом натрия, за исключением жидкостей, которые не проявляли мутности после центрифугирования. Впоследствии образцы культивировали методом Кудо в двух пробирках среды Огава-Кудох в соответствии с руководством Панамериканской организации здравоохранения.

Среды инкубировали при 37 ° С в горизонтальном положении, и считывание производилось еженедельно; если после восьмой недели рост не наблюдался, они были отмечены как отрицательные. Предварительная обработка клинических образцов для молекулярного тестирования.

Как проводится сама ПЦР-диагностика

Для проведения подобного метода исследования необходимо сначала взять тот или иной материал. После этого он попадает в специальную камеру, называемую амплификатором. Названа она таким образом по той причине, что именно здесь происходит удвоение цепи ДНК, позволяющее в дальнейшем вынести положительный или отрицательный результат.

Процедура, адаптированная для тканей, заключалась в механической гомогенизации небольшими кусочками и последующей ее мацерации в 2 мл солевого раствора, забуференного фосфатами. Эту суспензию переносили в 15 мл пробирку и добавляли 4% гидроксид натрия в соотношении 1: 1; эту смесь затем гомогенизировали в вихревом смесителе в течение 20 секунд и инкубировали в течение 15 минут при комнатной температуре. Супернатант отбрасывали и осадок снова суспендировали в 2, 5 мл реагента набора. Эту смесь гомогенизировали в вихревой мешалке в течение 5 секунд и оставляли стоять в течение 15 минут при комнатной температуре.

В амплификаторе находятся все необходимые ферменты для того, чтобы обеспечить возможность удвоения молекул ДНК. В дальнейшем оценивается их количество. Таким методом устанавливается факт наличия или отсутствия .

Современные аппараты не только выполняют полимеразную цепную реакцию, но также и выдают результаты проведенного обследования. В дальнейшем их расшифровкой занимается врач-фтизиатр. Пациент должен прийти к данному специалисту с выпиской, в которой указаны результаты проведенного исследования.

Обрабатывали образцы спинномозговой, плевральной, синовиальной, перитонеальной и перикардиальной жидкостей с мутностью, а также ткани без мутности, концентрировали центрифугированием и добавляли непосредственно к картриджу. Те, у которых объем менее 2 мл, были заполнены реагентами до достижения 2, 5 мл.

Как только картриджи были помещены в инструмент, был запущен протокол запуска и автоматического анализа. В картридж встроен контроль экстракции и усиления, что гарантирует достоверность результатов. Чувствительность противотуберкулезных препаратов. Культура в среде Огава-Кудох использовалась в качестве эталонного метода для расчета чувствительности, специфичности и прогностических значений молекулярного теста. Этические и институциональные соображения.

При этом доктор пользуется следующей системой оценки:

менее 0,9 относительных единиц говорят об отрицательном результате;
от 0,9 до 1,1 относительных единиц свидетельствуют о сомнительном результате;
более 1,1 относительных единиц говорят о положительном результате исследования, то есть о наличии туберкулеза.

В результате доктор получает возможность достаточно легко определить наличие или отсутствие возбудителя заболевания в исследуемом материале.

Он был одобрен Исследовательским отделом и комитетом по этике учреждения и с одобрением Управления больниц, чтобы продвинуть исследование и подготовить рукопись. В исследование было включено 376 проб, из которых четыре были исключены из-за загрязнения культуры, так что было окончательно оценено 372 образца из 301 пациента, так как некоторые из них были взяты два или более для анализа из-за Подозревают наличие туберкулеза в течение периода исследования. Из всех образцов 182 приходили от мужчин; средний возраст у обоих полов составил 42 года, а у 50% пациентов - до 41, 5 года.

К кому обратиться за проведением анализа?

В настоящее время есть сразу несколько специалистов, которые могут назначать подобный вариант исследования.

Основными среди них являются следующие врачи:

Результаты анализа представлены для образцов и пациентов. Анализ, расслоенный анатомическим сайтом, показал чувствительность более 75% для жидкостей и тканей, но он не мог быть определен абсцессами из-за нескольких образцов. Никакой изолят не показал резистентность только к изониазиду фенотипическим методом.

Что касается времени для получения результатов, определение наличия или отсутствия микобактерии и ее чувствительности к рифампицину в положительных случаях в среднем составляло два дня; что касается культуры, результаты были получены в среднем за 27 дней для положительных выделений, и для определения чувствительности к препаратам первой линии с использованием метода пропорций потребовалось до 60 дней.

пульмонолог;
фтизиатр;
терапевт;
педиатр.

Несмотря на то, что назначить ПЦР для диагностики туберкулеза может каждый из этих специалистов, однако оценить результаты такого анализа и установить окончательный диагноз может только врач-фтизиатр.

Помимо этого, он назначит необходимый курс лечения, установит, где именно он должен проходить (на дому или в специализированном стационаре), а также предоставит пациенту все необходимые рекомендации по изменению образа жизни.

Ранняя диагностика и первичное лечение туберкулеза являются важными стратегиями, которые имеют большое значение для решения этой проблемы общественного здравоохранения. В случае настоящего исследования была проведена быстрая диагностика внелегочного туберкулеза с образцами различных тканей и жидкостей, из которых десять имели отрицательный мазок мокроты и положительную культуру, а одна из них - спинномозговая жидкость, проявляла резистентность к рифампицину.

С другой стороны, диабет, который был вторым наиболее частым начальным диагнозом у включенных пациентов, обычно сообщается как предрасполагающий фактор развития туберкулеза легких, но также как фактор риска развития милиарного туберкулеза совместно с другими переменными, такими как недоедание, алкоголизм, хроническая почечная недостаточность, трансплантация и использование иммунодепрессантов. В этом исследовании только один пациент с этим базовым диагнозом испытал положительный результат на молекулярном испытании в неуточненном образце ткани.

Преимущества и недостатки методики

ПЦР-анализ на туберкулез обладает целым рядом плюсов, которые привлекают, как пациентов, так и врачей-специалистов. Основными среди них являются следующие:

Еще одним огромным преимуществом, которое предоставляет именно такой диагностический процесс, является возможность определения устойчивости бактерий к тем или иным антибиотиками. В результате, подобный анализ крови или мокроты позволяет установить, к каким именно медикаментозным препаратам наиболее чувствительна микобактерия туберкулеза.

Эффективность молекулярных тестов для выявления туберкулеза у детей не была тщательно оценена, хотя в некоторых предыдущих исследованиях было высказано предположение, что это будет похоже на то, что отрицательный тест на мазок мокроты у взрослых. С точки зрения чувствительности и специфичности в недыхательных образцах, показатели чувствительности 59% и специфичность 92% были обнаружены в странах с высокой распространенностью.

Аналогичным образом, в исследовании, проведенном в Испании, Клементе и др. обнаружил общую чувствительность 73, 6% и специфичность 99, 9%. В другом отчете были получены также согласованные результаты с чувствительностью 95% и специфичностью 100%, но это исследование не включало анализ на анатомическом участке. В предыдущем локальном исследовании с 144 внелегочными образцами общая чувствительность составляла 70%, а специфичность составляла 97, 7%, и хотя она не указывала происхождение образцов, она сравнима с настоящей работой в смысл в том, что минимальная чувствительность составила 75%.

Отзыв нашей читательницы - Анастасии Макаровой

Недавно я прочитала статью, в которой рассказывается о Монастырском сборе отца Георгия для лечения и профилактики туберкулеза. При помощи данного сбора можно не только НАВСЕГДА вылечить туберкулез, но и восстановить легкие в домашних условиях.

Что касается процента положительности, более высокая частота была обнаружена в тканевых формах, в неуточненных тканях или в тканях из ганглия. Однако в плевральной, синовиальной, перитонеальной и перикардиальных жидкостях результаты были неубедительными из-за ограниченного количества образцов, проанализированных в течение периода исследования; однако было достигнуто хорошее согласие с эталонным методом. Местные данные показали 14, 5% случаев внелегочного туберкулеза.

В рассмотренных статьях плевральный туберкулез описывается как одна из наиболее частых форм внелегочной локализации в мире, за которой следует лимфатическая форма, и оба являются наиболее распространенными вариантами у молодых пациентов. Хотя 48 образцов этого типа были обработаны и, несмотря на то, что они были второй наиболее частой жидкостью среди проанализированных образцов, эти результаты не являются окончательными с точки зрения производительности; С другой стороны, предыдущее лечение, описанное в методике, позволило обрабатывать объемы более 3 мл.

Я не привыкла доверять всякой информации, но решила проверить и заказала упаковку. Изменения я заметила уже через неделю: я ощутила прилив сил и энергии, улучшился аппетит, кашель и одышка - отступили, а через 2 недели пропали совсем. Мои анализы пришли в норму. Попробуйте и вы, а если кому интересно, то ниже ссылка на статью.

В конечном итоге, можно достаточно быстро не только установить сам факт наличия заболевания, но также и назначить максимально эффективный курс лечения. Результатом станет значительно меньшее количество осложнений у пациентов.
Что касается менингеального сообщения, то сообщалось, что он составляет примерно 1% от распространенности туберкулеза, который является одним из самых разрушительных из-за его высокой смертности и тяжелых неврологических осложнений у выживших; Кроме того, из-за низкой чувствительности микроскопии мазка, которая может достигать лишь 20%, ее прогноз усугубляется задержкой в диагностике и, следовательно, в начале лечения.

Что касается образцов тканей, хотя большое количество из них не указывало, из каких тканей они поступают, была получена хорошая чувствительность. В другом исследовании, в котором были обнаружены анатомические сайты, в которых были получены образцы, не было указано, хотя предполагается, что они включают лимфатические узлы, общая оценка была выше 88%.

При этом такой вариант исследования позволяет установить подобную устойчивость всего-навсего за 2 дня. Прочие варианты обследования не предоставляют таких же возможностей. Срок установления восприимчивости к определенным антибактериальным лекарственным средствам, если берется обычный анализ крови, может достигать 1 месяца.

Несмотря на небольшое количество положительных случаев, время и возможность ответа как на положительные, так и на отрицательные результаты значительно снизились, и молекулярный тест превысил почти в три раза положительные результаты, полученные с помощью микроскопии мазка; Кроме того, следует учитывать, что при внелегочном туберкулезе эффективность микроскопии зависит от типа образца, так как он лучше в тех, которые получены путем биопсии ткани, и явно ниже в биологических жидкостях. С другой стороны, отрицательный мазок мокроты не следует рассматривать как окончательный диагноз.

Кому проводится?

ПЦР туберкулеза хорош еще и тем, что может проводиться у следующих групп пациентов:

У детей;
У пациентов с иммунодефицитом.

при помощи данного метода исследования используется достаточно часто. При этом намного чаще для этих целей проводится именно анализ крови, а не мокроты. Это обусловлено тем, что далеко не всегда ребенок, особенно маленький, способен в точности выполнить указания специалиста для того, чтобы получить достаточное количество мокроты из дыхательной системы.

Другие преимущества теста заключаются в том, что он служит для измерения чувствительности к препарату первой линии, рифампицину и что в изолятах с положительными результатами в культуре и по методу пропорций он также прогнозирует чувствительность к изониазиду в 100% оцениваемых штаммов.

В предыдущем исследовании, особенно в респираторных образцах, эта информация была поднята как другая переменная, которая должна быть включена в отчеты общественного здравоохранения из-за ее сильной корреляции с методами микроскопии. Что касается ложных негативов, другие авторы предположили, что в молекулярных тестах такие результаты обусловлены наличием ингибиторов или технических лабораторных ошибок. Кроме того, было задокументировано, что обеззараживание стерильных и нестерильных образцов может снизить бациллярную нагрузку и, как следствие, снизить чувствительность теста.

При острой необходимости для получения подобного биологического материала можно провести бронхоскопию. Ребенок, как, впрочем, и взрослый, достаточно тяжело переносит подобный вариант исследования, поэтому его проводят только в исключительных случаях.

Для пациентов с иммунодефицитом подобный вариант исследования является основным методом исследования. Это обусловлено тем, что ИФА-диагностика для данной группы лиц является малоинформативной.

Связано такое положение с тем, что у них значительно уменьшена выраженность иммунного ответа на проникновение инфекции. Кровь подобных пациентов содержит сравнительно небольшое количество антител. Кроме этого, детям с ослабленным иммунитетом не рекомендуется проводить обследование с использованием реакции Манту. ПЦР-диагностика для них становится отличным выходом из сложной ситуации.

Основные минусы

Помимо несомненных преимуществ, у подобного метода исследования имеются и свои недостатки. Основными среди них являются следующие:

В результате, применимым данное исследование может быть для лиц с иммунодефицитом или же в случаях с пациентами, которые находятся в тяжелом состоянии. Кроме этого, особенно ценной полимеразно-цепная реакция становится в диагностике туберкулеза легких для детей, которым противопоказаны другие методы диагностики. В остальных случаях его проведение обязательно должно дополняться другими методами.

Специфическая туберкулезная инфекция многие годы присутствует в тканях и структурах человека, а при определенных обстоятельствах быстро распространяется по организму за 2-3 месяца. Порой оптимальный курс лечения выбрать очень тяжело по причине запоздалой диагностики и адаптации возбудителя ко многим медикаментам.

Новейшая ПЦР диагностика туберкулеза помогает обнаружить не только развившуюся болезнь, но и сам возбудитель, когда первые признаки заболевания еще не появились.

Что такое ПЦР?

Способом ПЦР появилось недавно. В 1983 году микробиолог из Америки Кэри Муллис изобрёл процедуру, при которой микроорганизмы стало возможно восстановить из биологического материала по короткому сегменту. Эта работа заслужила Нобелевскую премию.

ПЦР на туберкулез – это полимерный цепной процесс, при котором проходит диагностика и выявление вирусных возбудителей способом генной инженерии. Методика используется в иммунологических, микробиологических, вирусологических и биохимических лабораториях.

Универсальный метод помогает докторам при диагностике и выявляет инфекционный процесс даже после первых часов заражения, задолго до появления симптомов . Исследование возможно даже при маленьком количестве биоматериала.

Что нужно для проведения анализа?

Несколько отрезков ДНК (праймеров), с них начинается биологический синтез;
Нуклеотидные соединения, основа молекулы ДНК или же РНК;
Фермент полимераза, которая ускоряет анализ ПЦР.

В чём основа метода?

Сначала из биоматериала от заразившегося человека выделяется сегмент ДНК, при помощи генно-молекулярных способов биосинтеза дальше определяется тип микроорганизмов, которому принадлежит биофрагмент.

Эта сложная реакция занимает меньше времени, чем некоторые биометоды. ПЦР определяет возбудителя за несколько часов, при этом не существует надобности выделять его из биологической жидкости (мокроты, спинномозговой или кровяной среды), не нужно долго растить его на питательной среде. Достаточно, чтобы исследуемый материал содержал нить ДНК инфекционного возбудителя.

При проведении анализа крови ПЦР на туберкулез в пробирке искусственны путем создается синтез рибонуклеиновых кислот туберкулезной микобактерии.

Ступени диагностирования

Молекулярная реакция способом ПЦР – это несложная манипуляция, занимающая мало времени. Берется необходимый биоматериал: для определения tbc используется кровь, мокрота, промывная жидкость бронхов.

Сначала разрушается первичная форма ДНК, разъединяются 2 цепочки при высокой температуре (максимум 98ОС не больше 2 минут);
Затем производится отжиг, первичная температура понижается на несколько делений, возникает связь нити ДНК с праймером;
Следующая стадия называется элонгация, при этом происходит биосинтез необходимых молекулярных структур.

Для получения нужного количества копий ДНК должно пройти от 25 до 30 таких циклов, при этом получившееся количество микобактерий легко распознаётся.

Обязательно ли делать ПЦР при туберкулезе?

Непосредственно всем пациентам с подозрением на ТВЦ проведение цепной диагностики не делается, так как процедура требует использования дорогого оборудования. Не все лечебные государственные учреждения позволяют его приобрести, тем более, что привычные методики диагностирования на микобактерии туберкулеза тоже информативны.

Сюда относят:

Тщательное собирание анамнеза, опрашивание больного;
Внешний осмотр;
Туберкулиновая проба Манту;
Рентгенографическое либо флюорографическое обследование;
По надобности компьютерное диагностирование;
Микроскопическое или бактериологическое исследование маска с мокротой.

ПЦР на туберкулез делается исключительно тогда, когда не имеется возможности сделать другой инструментальный анализ либо в сложных для диагностики обстоятельствах.

Несмотря на то, что изобрели великое множество методов диагностирования, количество больных туберкулезом продолжает расти. Кроме того заболеваемость приобрела некоторые особенности : нередко наблюдается тяжелая форма недуга, увеличивается число летальных исходов, возбудитель приобретает устойчивость имеющимся химиопрепаратам.

Многие люди не желают каждый год проходить профилактический осмотр, отказываются от вакцинации, что ведет к увеличению заболеваемости. Такие обстоятельства требуют эффективных и информативных способов исследования, доступных для взрослых и детей с диагнозом tbc. ПЦР имеет преимущества перед другими диагностическими методиками.

В чём ценность метода?

Это новейшее исследование отлично себя зарекомендовало. Если по ряду причин сложно поставить диагноз или в некоторых спорных случаях, ПЦР легче обнаруживает туберкулезную палочку в биологическом материале, чем другие методы.

Это быстрое исследование, небольшой отрезок молекулы дает возможность поставить точный диагноз за короткое время приблизительно за 5 часов, это применяется в экстренных случаях, например перед неотложным оперативным вмешательством;
Исследование крови на туберкулез возможно, когда другие методики недоступны или противопоказаны – иногда для обнаружения возбудителя tbc приходится делать множество Rg -снимков, облучающая доза при этом слишком большая;
Используя полимеразную реакцию можно исследовать любые биологические жидкости на присутствие микобактерии. К примеру, можно проводить изучение спинномозговой жидкости при туберкулезном менингите или мочи при мочеполовом туберкулезе;
Метод безопасен, диагностика туберкулеза у детей при помощи ПЦР не вызывает сложности;
Способ полимерной реакции выявляет туберкулезную палочку при любых формах и стадиях недуга;
Наличие в биоматериале всего нескольких бактерий позволяет увидеть присутствие микроорганизмов, так как это чувствительная реакция;
ПЦР легко диагностирует рецидив болезни.

Несмотря на огромное количество плюсов, всем больным с подозрением на tbc исследование не делается, так как существуют и минусы, их так же учитывают.

Видео

Видео - ранняя диагностика

В чем недостатки?

Этот метод диагностики является скорее исключительным, чем закономерным, для этого имеются причины. В первую очередь во внимание берётся дороговизна метода. Оборудование дорого стоит, государственные поликлиники не имеют возможности его приобрести из-за высокой цены, но большинство платных лабораторий оборудование имеют, анализ в них делается.

Существующие недостатки:

Метод обнаруживает убитые бактерии, которые погибли после лечения, при этом ПЦР показывает положительный результат. Сразу после химиотерапии проводить исследование нет смысла, так как результат будет недостоверным;
Туберкулезные микобактерии подвержены мутации, что приводит к неэффективности способа, при этом нить ДНК не может последовательно синтезироваться.

Среда для исследования должна тщательно выбираться, взятие крови или мочи происходит только в том случае, если есть подозрение на заражение. Нельзя взять мокроту для исследования, если подозревается туберкулез костей . В этой ситуации диагностика будет неверной.

Кровь и моча больного туберкулезом для изучения на ПЦР берется редко, выявление болезни таким способом сомнительно. В этих биосредах возбудитель определяется только при сепсисе, либо в случае . Локальные формы встречаются наиболее часто, при них кровь и моча могут оставаться без изменений. Чаще всего для изучения берется мокрота.

Кому показан анализ?

Большинство больных направляются на ПЦР диагностику в спорных и сложных случаях туберкулеза. Когда медицинские работники выдают направление на исследование?

Если произошел контакт с человеком, у которого достоверно поставлен диагноз туберкулёза, но обычными способами диагностику сложно провести;
При тех обстоятельствах, если больного предоставить в поликлинику невозможно для рентгенографии или других исследований. В такой ситуации его проще обследовать при помощи полимерного метода. Анализ мокроты просто доставляется в лабораторию в специальной таре, а результат становится известен спустя несколько часов;
Перед операцией бывает необходимо срочно определить болен ли пациент туберкулезом, в этом случае показано проведение ПЦР;
Из-за безопасности способа, можно проводить обследование беременной женщины или ребёнка, при этом не создается дополнительная рентген-нагрузка;
Сомнительные результаты теста Манту.

Каждый желающий может пройти обследование платно, если туберкулез не подтвердился при помощи бактериологии и рентгеноскопии. Так случается, если очаг в лёгочной ткани невидим на Rg- снимке в прямой проекции, а пациент не смог собрать мокроту правильно, но человека беспокоят.

Современная ПЦ реакция для диагностики – это залог успешного лечения, в результате которого распространенность заболевания снижается. Традиционные способы определения недугов не всегда дают желаемый эффект.

Так ПЦР анализ на сегодняшний день стал одним из достоверных и безопасных методов диагностирования на ранних сроках развития болезни.